革蘭染色法一般包括初染、媒染、脫色、復(fù)染等四個(gè)步驟。未經(jīng)染色的細(xì)菌，由于其與周圍環(huán)境折光率差別甚小，故在顯微鏡下極難區(qū)別。經(jīng)染色后，陽(yáng)性菌呈紫色，陰性菌呈紅色，可以清楚地觀察到細(xì)菌的形態(tài)、排列及某些結(jié)構(gòu)特征，從而用以分類鑒定。染色原理：通過結(jié)晶紫初染和碘液媒染后，在細(xì)菌細(xì)胞壁內(nèi)形成了不溶于水的結(jié)晶紫與碘的復(fù)合物，再用95%乙醇脫色。

革蘭染色是一種廣泛使用的細(xì)菌學(xué)染色方法，它的主要原理是通過使用不同的染料和處理步驟，將細(xì)菌分為革蘭陽(yáng)性和革蘭陰性兩類。

這種方法是由丹麥醫(yī)生漢斯·克里斯蒂安·約阿希姆·革蘭于1884年發(fā)明的，至今已經(jīng)有超過130年的歷史。盡管現(xiàn)代細(xì)菌學(xué)已經(jīng)發(fā)展出了許多更先進(jìn)的技術(shù)，但革蘭染色仍然在實(shí)驗(yàn)室中被廣泛使用，因?yàn)樗?jiǎn)單、快速且可靠。

革蘭染色的原理主要基于細(xì)菌細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)差異。細(xì)菌細(xì)胞壁是細(xì)菌的一個(gè)重要組成部分，它不僅為細(xì)菌提供了結(jié)構(gòu)支撐，還保護(hù)了細(xì)菌內(nèi)部的生物活性物質(zhì)。

細(xì)菌細(xì)胞壁的主要成分是肽聚糖，這是一種由N-乙酰葡萄糖胺和N-乙酰胞壁酸交替連接而成的大分子聚合物。然而，不同類型的細(xì)菌細(xì)胞壁在結(jié)構(gòu)和組成上存在顯著的差異，這主要取決于它們的生長(zhǎng)環(huán)境和生活方式。

革蘭陽(yáng)性細(xì)菌的細(xì)胞壁比革蘭陰性細(xì)菌的細(xì)胞壁更厚、更復(fù)雜。革蘭陽(yáng)性細(xì)菌的細(xì)胞壁主要由多層肽聚糖和肽聚糖間的肽鏈組成，這些肽鏈?zhǔn)沟眉?xì)胞壁具有高度的穩(wěn)定性和抗?jié)B透性。

此外，革蘭陽(yáng)性細(xì)菌的細(xì)胞壁還含有大量的脂肪酸和磷壁酸，這些物質(zhì)可以增加細(xì)胞壁的強(qiáng)度和穩(wěn)定性。因此，革蘭陽(yáng)性細(xì)菌的細(xì)胞壁對(duì)大多數(shù)常用的染料具有很高的抵抗力。

革蘭陰性細(xì)菌的細(xì)胞壁則比革蘭陽(yáng)性細(xì)菌的細(xì)胞壁更薄、更簡(jiǎn)單。革蘭陰性細(xì)菌的細(xì)胞壁主要由一層肽聚糖組成，沒有肽鏈層。這使得革蘭陰性細(xì)菌的細(xì)胞壁對(duì)染料的抵抗力較低。然而，革蘭陰性細(xì)菌的細(xì)胞壁含有一種叫做脂多糖（LPS）的復(fù)雜分子，它可以增加細(xì)胞壁的穩(wěn)定性和抗?jié)B透性。

此外，革蘭陰性細(xì)菌的細(xì)胞壁還含有一些其他的化學(xué)修飾物，如硫酸鹽、磷酸鹽和氨基酸，這些物質(zhì)可以進(jìn)一步增加細(xì)胞壁的穩(wěn)定性和抗?jié)B透性。

革蘭染色的過程主要包括四個(gè)步驟：預(yù)處理、結(jié)晶紫染色、碘液脫色和沙黃復(fù)染。在預(yù)處理步驟中，細(xì)菌被固定在載玻片上，然后用乙醇脫水。

在結(jié)晶紫染色步驟中，細(xì)菌被浸泡在結(jié)晶紫溶液中，革蘭陽(yáng)性細(xì)菌的細(xì)胞壁對(duì)結(jié)晶紫有很強(qiáng)的吸附力，而革蘭陰性細(xì)菌的細(xì)胞壁對(duì)結(jié)晶紫的吸附力較弱。

在碘液脫色步驟中，細(xì)菌被浸泡在碘液中，革蘭陽(yáng)性細(xì)菌的細(xì)胞壁會(huì)保留結(jié)晶紫，而革蘭陰性細(xì)菌的細(xì)胞壁會(huì)脫去結(jié)晶紫。在沙黃復(fù)染步驟中，所有的細(xì)菌都被浸泡在沙黃溶液中，革蘭陽(yáng)性細(xì)菌會(huì)呈現(xiàn)出紫色，而革蘭陰性細(xì)菌會(huì)呈現(xiàn)出黃色。

總的來(lái)說(shuō)，革蘭染色的原理是基于細(xì)菌細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)差異，通過使用不同的染料和處理步驟，將細(xì)菌分為革蘭陽(yáng)性和革蘭陰性兩類。這種方法簡(jiǎn)單、快速且可靠，因此在實(shí)驗(yàn)室中被廣泛使用。

然而，需要注意的是，雖然革蘭染色可以提供關(guān)于細(xì)菌類型的重要信息，但它不能提供關(guān)于細(xì)菌的其他特性，如毒力、抗生素敏感性和代謝能力等信息。因此，當(dāng)進(jìn)行細(xì)菌感染的研究和診斷時(shí)，通常還需要使用其他更先進(jìn)的技術(shù)。